基因PCR測定試劑盒是一種基于聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction,PCR)技術,用于特異性擴增和檢測目標DNA或RNA序列的分子診斷工具,廣泛應用于病原微生物檢測、遺傳病篩查、腫瘤基因突變分析、藥物基因組學、法醫鑒定及科研實驗等領域。該試劑盒通過高度優化的反應體系,實現對微量核酸樣本的快速、靈敏、特異性識別與定量。
其工作原理是:在熱循環儀中,通過反復的變性(94–98℃)、退火(50–65℃)和延伸(72℃)步驟,使目標核酸片段呈指數級擴增。熒光信號隨產物累積而增強,儀器實時監測并生成擴增曲線,通過Ct值(循環閾值)判斷樣本是否含有目標基因,并可實現絕對或相對定量。
1、低溫保存:大多數基因PCR測定試劑盒需要在低溫條件下保存,通常建議在20℃或更低的溫度下保存。這是因為低溫可以減緩化學反應的速度,從而延長試劑的有效期限。例如,Taq DNA聚合酶在低溫下能保持穩定的空間結構,若儲存溫度過高,其活性中心結構可能改變,導致酶活性降低,影響PCR擴增效率。
2、密封包裝:試劑盒中的試劑應保持密封狀態,以防止污染和氧化。使用前不要打開包裝,除非準備立即使用。
3、避光存放:某些試劑可能對光敏感,因此應避免陽光直射或強光照射。將試劑盒存放在陰涼、干燥的地方,或者使用棕色瓶等避光容器進行保存。
4、合理解凍:如果試劑需要從冷凍狀態解凍,應在使用前逐漸升溫至室溫,避免快速解凍導致試劑失活或變質。可以先將試劑盒放置在過渡區域,如冰箱門口附近,使其緩慢升溫至室溫,減少冷凝水形成。若試劑盒表面出現冷凝水,需用干凈的紙巾輕輕擦干,避免水分滲入試劑盒內部,污染試劑。
5、注意有效期:檢查試劑盒上的生產日期和有效期,確保在有效期內使用。過期的試劑可能會失去活性,影響PCR反應的結果。
6、單獨放置陽性對照:如果試劑盒中包含陽性對照,應將其單獨放置,避免污染其他試劑。
7、減少溫度波動:頻繁的溫度升降會使試劑反復經歷凍融循環,這對試劑盒中的某些成分,如蛋白質類的酶和核酸類的引物、探針等危害極大。凍融循環可能導致蛋白質變性、核酸斷裂,進而降低試劑盒的性能。因此,應使用配備溫度監控和穩定系統的專業低溫冰箱,定期檢查冰箱溫度,確保其穩定在規定范圍內。
8、控制濕度:試劑盒應存放在干燥的環境中,過高的濕度可能導致試劑吸潮,使固體試劑結塊,影響其溶解性和均一性。同時,水分可能引發化學反應,加速試劑變質。可以將試劑盒置于有干燥劑的密封容器中,或者存放在具有除濕功能的專用試劑儲存柜內。
9、規范使用操作:在使用試劑盒過程中,應嚴格遵守無菌操作規范,防止交叉污染。使用專用的移液器、吸頭,避免不同試劑間相互污染。例如,吸取不同成分的試劑時,務必更換新的吸頭,防止殘留試劑在移液器內混合,影響后續實驗。同時,在超凈工作臺等無菌環境中進行試劑配制和樣本處理,能有效降低環境微生物對試劑盒的污染風險。
10、記錄使用情況:建立試劑使用記錄,包括開封日期、使用次數、剩余量等,以便及時補充和更新試劑。